Возбудитель лейшманиоза

1. Характеристика лейшманий
2. Забор материала
3. Микроскопическое исследование
4. Бактериологическое исследование
5. Биологическая проба

1.  Лейшманиоз —это протозойное трансмиссивное заболевание человека и животных, при котором поражаются внутренние органы (внутренний лейшманиоз) или кожа и слизистые оболочки {кожный лейшманиоз).

Возбудители относятся к семейству трипаносом, роду лейшма-ний — паразиты из класса жгутиковых. Жизненный иикл лейш-маний протекаетсо сменой хозяев в виде 2 стадий:

• амастиготной (безжгутиковой) в организме позвоночного животного и человека;
• промастиготной (жгутиковой) — в организме членистоногого (москитов).

2.  Материал для исследования, отбор проб

При исследовании появившихся бугорков при кожном лейшма-ниозе протирают кожу спиртом и производят укол по направлению к середине бугорка. Из выступившей капли серозно-кровянистой жидкости готовят на предметных стеклах мазки,высушивают, фильтруют и окрашивают по Романовскому. При исследовании язвы с обильным отделяемым материал для исследования с поверхности брать не рекомендуется, так как обильная бактериальная флора и большое количество распавшихся клеток затемняют картину, поэтому материал берут путем пункции в приподнятый неизъязвившийся край язвы по направлению ко дну язвы. Из содержимого готовят мазки, высушивают, фиксируют и окрашивают по Романовскому. При внутреннем лейшманиозе исследованию подвергают пунктат костного мозга или усиленного лимфатического узла.

3.  Микроскопическое исследование. Окрашенные мазки исследуют с иммерсионной системой.

В мазках обнаруживаются лейшманиальные формы паразита. Эти стадии паразита имеют сферическую или чаще овоидную форму.

Размер 2—6 мкм, ядро одно, лежит в середине клетки, около ядра находится протопласт в виде короткой палочки или крупного кокка. По Романовскому цитоплазма окрашивается в голубой цвет, ядро — в красный, блефаропласт — в вишнево-красный — более темный цвет, чем ядро.

Паразиты наблюдаются в препарате как свободно лежащими, так и в цитоплазме больших одноядерных клеток типа макрофагов и других ретикуло-эндотелиальных клеток.

4.  Бактериологическое исследование.  Серозно-кровянистую жидкость из язвы вносят на среду ННН (агар + поваренная соль + дефибринированная кровь кролика).

Засеянные пробирки выдерживают при температуре 22—25 °С. Для предотвращения высыхания среды ватные пробки пробирок заливают горячим парафином. Рост в виде мелких прозрачных колоний, впоследствии сливающихся, обнаруживаются на 3—4-й день. Без пересева культуру можно сохранить 3— 4 недели и дольше. При посеве с поверхности агара петлей снимают отдельные колонии и засевают в пробирки со свежей средой на поверхность агара.

В культуре лейшмании представлены в виде лептомонадных форм. Они имеют удлиненное ланцетовидное тело размером 10—14 х 4—5 мкм с ядром в средней части тела и блефаропла-стом, лежащим около переднего конца тела паразита. От бле-фаропласта начинается свободно выходящий через переднийконец тела клетки жгут, в 1,5 раза длиннее тела паразита. Часть лептомонадных форм часто собирается в розетки (жгутами к центру) по 10—15 экземпляров. В старых культурах наблюдаются формы, лишенные жгута, в виде овальных, иногда круглых образований размером 4x5 мкм.

Серологические исследования — используются реакция связывания комплемента (РСК), иммуноферментная агглютинация (ИФА). 5. Биологическая проба. Возбудитель кожного лейшманиоза (мокнущая форма) человека может быть экспериментально привит белым мышам, песчанкам и хомякам. У последних часто развивается генерализованная инфекция. Материалом для заражения служат клетками из язвы или из культуры. Лейшмании из культуры вводят внутрикожно. Через 10—20 дней на месте введения лейшмании развивается инфильтрат, содержащий стадии паразита.