Возбудители кокковых пневмоний и их лабораторная диагностика
- Возбудители пневмоний
- Микроскопическое исследование
- Бактериологическое исследование
- Особенности лабораторной диагностики стафилококковых пневмоний
1. Возбудителями пневмонии могут быть различные микроорганизмы, проникающие в дыхательные пути человека из окружающей среды, — кокковые (пневмококки, стрептококки, стафилококки) и бациллярные (диплобациллы Флидлендера, палочки Пфейффера). Одним из наиболее частых возбудителей пневмонии, особенно крупозной, является пневмококк. В последнее время часты стафилококковые пневмонии.
2. Материалом для исследования служат: мокрота, слизь, взятая стерильным тампоном из носоглотки больного, гной, различные выпоты, пунктаты, кровь. Исследованию подвергают преимущественно мокроту или носоглоточную слизь.
Микроскопическое исследование: делают мазки на 2 предметных стеклах; один из мазков окрашивают по Граму, а другой — разведенным карболовым фуксином (краска Пфейффера). При нахождении в мазках ланцетовидных диплококков, окруженных светлой зоной неокрасившейся капсулы, ориентировочно устанавливают пневмококковую этиологию. Обнаружение расположенных цепочкой грамположительных кокков позволяет подавить предварительный диагноз стрептококковой инфекции.
Характерная морфология расположения группами в виде гроздей винограда и положительной окраски по Граму позволяет установить наличие стрептококков. Обнаружение в мазках мелких грамотрицательных палочек, часто образующих гнезд-ные скопления и нередко полярно окрашенных, указывает на палочку Пфейффера. Грамотрицательные диплобациллы различной величины, окруженные капсулой в виде светлого ореола, говорят о наличии диплобациллы Фридлендера.Микроскопический диагноз ориентировочный и предварительный.
3. Точное представление о микробном пейзаже дает:
- изучение посевов на кровяном агаре и других средах;
- выделение чистых культур из изолированных колоний;
- идентификация их.
Пневмококковые пневмонии: для бактериологического исследования материал засевают на чашки Петри, содержащие агар с добавлением 5—7% дефибринированой кроличьей крови. Посевы на кровяном агаре исследуют через 1—2 суток содержания в термостате при 37 °С.
Одновременно с изучением внешнего вида колоний производят отсев их в жидкие среды и микроскопирование. Колонии пневмококков на кровяном агаре имеют вид мелких полупрозрачных образований зеленовато-серого цвета, особенно заметного в тонком слое агара, в центре имеют небольшой плотный бугорок и более светлую периферию. Нередко колонии окружены как бы отсвечивающим ореолом. В жидких средах пневмококки вызывают равномерное помутнение без образования пленок и осадка.
Микроскопирование обнаруживает грамположительные парные кокки несколько удлиненной формы с заостренными наружными концами, напоминающими ланцет — ланцетивидные диплококки. Размеры их колеблются в пределах 0,5 х 0,75 до 1 х 1,5 мкм, располагаются одиночно, но могут образовывать короткие цепочки по 3—4 пары кокков. Пневмококки образуют капсулу, которая светлым ободком окружает оба кокка вместе, так как обычными методами окраски капсула не прокрашивается. Пневмококки легко лизируются в присутствии бычьей желчи и желчнокислых солей. Обнаруженные при исследовании культуры пневмококка подвергают дополнительному исследованию - определяют тип пневмококка, вирулентность для белых мышей и устойчивость к действию антибиотиков, а также производят серологические исследования (реакции агглютинации и преципитации — берется материал от больного и типовые пневмококковые сыворотки). Одновременно с посевом на агар исследуемый материал вводят внутрибрюшинно 2 белым мышам весом 18—20 г по 0,5 мл, т. е. ставят биологическую пробу.
4. Стафилококковая пневмония. Бактериологическое исследование
проводится с использованием молочно-солевого и кровяного агара. Для обнаружения стафилококков пользуются материалом (пунктат, выпоты, гной, экссудат), взятым непосредственно из очага болезни (плевральные и легочные полости), а также посевами крови, производимыми в строго стерильных условиях. Исследования слизи из зева и носа имеют второстепенное значение и лишь дополняют общую картину. 2-3 капли исследуемого материала помещают на поверхность чашки, содержащей молочно-солевой агар, посевы помещают в термостат при 37 "С. Посевы крови сохраняют в термостате до появления роста (помутнении). Если в течение 4—5 дней роста микробов не обнаруживается, считают отрицательными и уничтожают. Через сутки роста посевы извлекают из термостата и выросшие культуры подвергают изучению.
Колонии стафилококков на твердых средах представляют собой правильные диски с ровными краями, блестящей, умеренно выпуклой поверхностью, размером от 2 до 4 мм в диаметре. Колонии легко снимаются с агара, немного тягучи, непрозрачны, окрашены в золотисто-оранжевый, лимонно-желтый или белый цвет. На кровяном агаре патогенные штаммы стафилококков, как правило, окружены зоной более или менее выраженного гемолиза. В жидких средах стафилококки вызывают сильное диффузное помутнение, некоторые штаммы с образованием пленки. При стоянии пробирки на дне образуется осадок. Стафилококки грамположительньь
Под микроскопом стафилококки представляют собой довольно правильные сферические кокки с диаметром 0,6 до 0,9 мкм. Располагаются одиночно, попарно и даже короткими цепочками по 2—4 кокка, но основной формой являются неправильные скопления, напоминающие гроздья винограда.
Патогенные штаммы выглядят, как правило, лиловыми, а непатогенные — интенсивно синими. Выделенные из одной колонии штаммы культур стафилококка исследуют на патогенные свойства и чувствительность к антибиотикам. Из посевов крови ежедневно делают высевы на гемоагар и выделенные культуры подвергают тем же исследованиям. Понятие о патогенности стафилококковой культуры складывается из комплекса свойств изучаемого штамма:
- способности вырабатывать пигмент;
- вызывать гемолиз эритроцитов;
- коагулировать плазму крови;
- вырабатывать экзотоксин;
- лизироваться типовыми фагами.
Косвенным показателем патогенных стафилококков является их способность лизироваться типовыми стафилококковыми фагами, так как известно, что непатогенные штаммы не лизируются.
Серологическое исследование — наибольшее распространение получило определение уровня стафилококкового антитоксина в сыворотке больных в динамике, т. е. в начале и в конце болезни. Принцип титрования основан на нейтрализации гемолитических свойств стафилококкового токсина антитоксином, содержащимся в сыворотке больного. Обычно при наличии стафилококкового заболевания уровень антитоксина в крови больных нарастает в течение болезни, что подтверждает этиологическую роль стафилококка в данном заболевании. У резко ослабленных субъектов нарастание титра антитоксина может и не наблюдаться.